hplc是什么的简称(专业！液相色谱（HPLC）基础知

高效液相色谱技术：深入与应用

一、概述

高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography，简称HPLC），又被称为高压液相色谱、高速液相色谱、高分离度液相色谱以及近代柱色谱等。作为色谱法的一个重要分支，高效液相色谱技术以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱。在柱内，各成分得以分离，随后进入检测器进行检测，从而实现对试样的精准分析。这一方法已广泛应用于化学、医学、工业、农学、商检和法检等领域，成为重要的分离分析技术。

二、色谱法的本质与溯源

色谱法，又称为色层法或层析法，本质上是一种分离分析方法。自100多年前俄国植物学家Tswett首次使用色谱法分离植物色素以来，这一技术不断发展和完善。色谱法的命名源于希腊语，意为“色”和“谱”的结合，旨在描述这种实验方法。到了20世纪30年代，色谱法开始得到广泛应用，而高效液相色谱法的广泛应用则是在20世纪70年代。

三、HPLC的原理

高效液相色谱主要基于正相色谱、反相色谱以及空间排斥色谱等原理进行分离分析。

1. 正相色谱：流动相极性小于固定相极性的分配色谱法。常用的分析柱包括氨基柱、氰基柱、硅胶柱等，常用流动相为极性小的有机溶剂。

2. 反相色谱：流动相极性大于固定相极性的分配色谱法。常用的分析柱有ODS( C18)，C8，C2等，常用流动相为甲醇-水，乙腈-水等。

3. 空间排斥色谱（也称凝胶色谱）：依据被分离组分分子尺寸与凝胶空径大小之间的相对关系进行分离，类似于分子筛作用。

四、HPLC色谱系统

高效液相色谱系统主要由高效相色谱流程图、流动相类别等组成。其中，流动相是HPLC中的关键要素，按其组成分为单组分和多组分，按极性分为极性、弱极性、非极性，按使用方式分为等度洗脱和梯度洗脱。水作为流动相时，需使用超纯水并通过滤膜除去热源、有机物、无机离子及空气等。溶剂和试剂的纯度也对HPLC的结果有很大影响，需要使用色谱纯的溶剂和分析纯的试剂，并通过过滤以除去微小颗粒，避免堵塞色谱柱。

高效液相色谱技术以其高效、精准的分离分析能力，已成为科研、医学、工业等领域不可或缺的技术手段。通过对流动相、溶剂、试剂的精细控制，HPLC能够在分子层面上对物质进行精准分析，为我们揭示物质的内在奥秘提供了强有力的工具。流动相中的气泡，犹如隐秘的敌人，悄无声息地影响着我们的测定流程。这些微小的气泡在流动相中溶解或混合产生，却能在关键时刻造成不小的困扰。让我们深入了解这些气泡如何影响我们的实验过程。

这些气泡在泵中的出现，会让液流产生波动，进而影响保留时间和峰面积的计算。这可能导致实验数据的准确性受到质疑。当这些气泡进入色谱柱时，它们会使流动相绕流，导致峰形变宽或出现不规则形状，这无疑会影响我们的分析结果。更甚者，检测器中的气泡会制造基线波动，使得结果解读更加困难。

为了应对这些问题，我们需要关注流动相的保存方法。对于有机溶剂流动相，我们应将其密封在避光容器中，室温保存。对于含有缓冲盐的流动相，我们需要现配现用，并在低温下密封保存，一般不超过五天，以防止微生物的生长。对于混合了有机溶剂与水的流动相，更要注重低温密封保存，防止有机相的挥发。适宜的容器选择也是不可忽视的一环。

再来谈谈色谱柱的保养。氨基柱既可以作为正相柱使用，也可以作为反相柱使用，主要用于分离单糖、双糖类物质。乙腈和水是其主要分离条件，其中乙腈的比例为70%-85%，pH值在2至11之间。保存时需要用纯乙腈进行保护。特别需要注意的是，氨基柱较为脆弱，长时间使用水相会使其中的氨基水解。而C18柱是液相色谱中最常见的色谱柱之一，主要用于分离非极性到中等极性的有机化合物。它的寿命相对于氨基柱来说会长一些，但也需要避免走纯水以及高浓度的缓冲盐。水溶性凝胶色谱柱主要用于分离水溶性多糖和水溶性聚合物大分子，其分离条件为水，保存时需要用0.5%的叠氮化钠水溶液进行保护。此外还要避免走有机溶剂。

高效液相色谱法的实验流程严谨而有序。首先需准备流动相并进行脱气处理；开机检测部件连接情况并打开电源等待自检；对泵进行prime操作以排出管路中的气体并让流动相充满管路；安装色谱柱并用合适的条件进行系统平衡。

关于仪器的保养与维护同样重要。色谱柱的保养需要注意避免碰撞、弯曲或强烈震动；使用时要严格控制进样量并保持流动相的脱气；若长期不使用应用有机溶剂保存并封闭。HPLC部件的维护则需要定期清洗和检查。其中吸滤头可用5%稀硝酸超声清洗后用水冲洗；单向阀和在线过滤器也可用类似的方法清洗。泵的保养则需要注意使用清洁的流动相、经常清洗进液处的砂芯过滤头、防止泵内堵塞或有气泡等。此外还需要注意避免样品的交叉污染。如果有小伙伴对深入学习有兴趣可以留言咨询更多信息。